Aislamiento y caracterización biológica de bacteriófagos con actividad lítica sobre las bacterias Escherichia coli y Salmonella spp

Abstract

Los bacteriófagos o fagos son virus que parasitan bacterias y se consideran las entidades más abundantes de la biosfera. Una particularidad interesante de los bacteriófagos lo constituyen sus ciclos líticos al producir partículas virales y la subsecuente lisis celular de la bacteria que parásita. En las zonas rurales del sur de Sonora se han presentado brotes de enfermedades entéricas. Existe suficiente evidencia cientifica sobre la efectividad de los fagos como agentes de biocontrol, para eliminar bacterias entéricas como Escherichia coli y Salmonella spp. Estos agentes, han sido aprobados como GRAS (Generalmente reconocido como seguro, siglas en inglés). El objetivo de esta investigación es el aislamiento y caracterización biológica de bacteriófagos líticos propios del sur de Sonora, que tengan capacidad infectiva contra Escherichia coli y Salmonella spp. Para el aislamiento de estos organismos se tomaron muestras ambientales de aguas residuales y de riego de las comunidades rurales del sur de Sonora (colonia Allende y Alto de Jecopaco), los fagos se replicaron en doble agar, utilizando como cepas hospederas a las bacterias Escherichia coli y Salmonella choleraesuis. La purificación de los bacteriófagos se realizó con lavados utilizando solución buffer SM [fris-HCI, 50 mM, pH7.5; MgS04. 7H20 BmM; NaCI, 100Mm; Gelatina porcino 0.002% (p/v)] y ultracentrifugaciones. El ADN de los bacteriófagos fue extraído y purificado utilizando el mini kit QIAGEN lambda. Las muestras de los fagos fueron digeridas con enzimas de restricción endonucleasas (Hind 111, Eco RV, Bam HI, Eco RI), los fragmentos de ADN, fueron separados por electroforesis y visualizados con un trasniluminador de UV. Los resultados mostraron la presencia de tres bacteriófagos infectivos líticos, formando entre 150-400 UFP (Unidades Formadoras de Placa). Los bacteriófagos fueron designados por su origen (OAF1, DAF2 pertenecientes de agua residual y líticos de Escherichia coli 0157 (EC-48) y DJNoF perteneciente de agua superficial y lítico de Salmonella choleraesuis ATCC (10708). El fago DAF1, mostró un alto polimorfismo cuando fue digerido por las enzimas Hind 111, Eco RV y Eco RI, el fago DAF2 fue el que presentó mayor polimorfismo al ser digerido por las cuatro enzimas. En contraste el fago OJNoF, mostró menor polimorfismo. Estos resultados muestran las diferencias genéticas de los fagos líticos para las bacterias Escherichia coli y Sa/manella choleraesuis y sugieren que pueden ser estudiados para el control de enfermedades infecciosas.