Establecimiento de condiciones de PCR punto final para la detección de Bordetella pertussis en el laboratorio Estatal de Salud Pública del Estado de Sonora

Abstract

La tosferina es causada por el cocobacilo Bordetella pertussis (B. pertussis), a pesar de las altas coberturas de vacunación durante varias décadas, continúa siendo una de las principales causas de muerte infantil tanto en países en vías de desarrollo como en los desarrollados, por lo que se ha declarado como una enfermedad reemergente por la Organización Mundial de la Salud (OMS). Lo anterior lleva a la necesidad de disponer de herramientas rápidas y confiables para establecer un diagnóstico oportuno. El objetivo de este trabajo fue establecer las condiciones de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) punto final para amplificar y detectar la secuencia de inserción IS148 repetitiva en el genoma de B. pertussis y así utilizar esta técnica de diagnóstico molecular como una alternativa en ausencia de la PCR en tiempo real (PCR-TR) para detectar B. pertussis en exudados nasofaríngeos en el Laboratorio Estatal de Salud Pública del Estado de Sonora (LESPSON). Para lograr establecer las condiciones de PCR punto final se trabajó con 181 muestras de ADN positivas a B. pertussis y 23 muestras de ADN negativas a B. pertussis por la técnica de PCR-TR proporcionadas por el Laboratorio Estatal de Salud Pública del Estado de Sonora (LESPSON). En la primera etapa del trabajo se definieron las condiciones para realizar la PCR utilizando una cepa control, posteriormente se buscaron las condiciones óptimas para la realización de la PCR y electroforesis en gel, esperando una banda característica de 424 pb. Las muestras que resultaron positivas por PCR punto final, posteriormente se analizaron con la enzima restricción con la Alu l, obteniendo una banda de 124 pb y otra de 120 pb, esto con el objetivo de aumentar la especificidad analítica de la técnica. En base a los resultados obtenidos se realizó un análisis estadístico utilizando la prueba de Chi cuadrada (X2) en la modalidad de tablas de contingencia de 2x2 con lo que se corroboró que los datos positivos por PCR punto final fueron significativos respecto a los positivos por PCR-TR. Al obtener los resultados esperados, se puede implementar la técnica de PCR punto final para detectar B. pertussis en el LESPSON de manera alternativa a la técnica de PCR-TR. Esto repercutirá en un diagnóstico de tosferina oportuno y generará datos para la vigilancia epidemiológica de esta enfermedad.