Desarrollo de métodos de extracción de ADN en saliva: frotis bucal y sangre fijada en papel filtro utilizando detergente comercial

Abstract

El ADN utilizado para análisis genéticos individuales y poblacionales provienen comúnmente de muestras de sangre periférica, que además de resultar una técnica costosa suele incomodar a los sujetos de estudio por su carácter invasivo y/o doloroso, derivado de ello se tiene la necesidad de generar una técnica de extracción de muestras, que no solo sea económica y rápida, sino que sea poco invasiva e indolora para los sujetos de estudio y útil para posteriores estudios, por lo cual en esta investigación se pretendió desarrollar métodos de extracción de ADN genómico (ADNg) mediante el uso de una solución con detergente comercial 40 mg/mL posterior al paso de lisis, para la obtención de ADN de buena calidad y pureza, a partir de muestras de saliva, frotis bucal y sangre fijada en papel filtro. Se desarrollaron protocolos de extracción de ADNg basándose en el método de Choi y col. (2014) para muestras de sangre fijada en papel filtro y el método de Quinque y col. (2006) para muestras de saliva y frotis bucal, siendo modificados al utilizar una solución de detergente comercial (40 mg/mL) a diferencia de proteinasa K posterior a la etapa de lisis en cada uno de los protocolos. El ADN obtenido fue analizado utilizando espectrofotometría, electroforesis y PCR. La saliva y frotis bucal como métodos no invasivos resultaron idóneos, debido a que hubo 65% más de participación por parte de los sujetos de estudio en comparación con la sangre fijada en papel filtro. La pureza del ADNg total extraído por medio del método de sangre fijada (43.4 ± 12.2 ng/μL) fue menor comparado a los obtenidos por el extraído de saliva (98.79 ± 72.03 ng/μL) y frotis bucal (53.76 ± 29.99 ng/μL). Los resultados mostraron la utilidad del empleo del método de extracción de ADNg total, indicando que el desarrollo del protocolo para muestras de sangre fijada en papel filtro, saliva y frotis bucal, resultó ser exitoso; logrando obtener una buena concentración de ADNg total en condiciones de pureza apropiadas como para permitir la reacción de amplificación del gen constitutivo IRF6 por PCR.