Purificación de la betaina aldehído deshidrogenasa de camarón blanco (Litopenaeus vannamei)

Abstract

En el presente trabajo se estableció una metodología viable para la purificación de la enzima betaína aldehído deshidrogenasa de tejido de camarón blanco (Litopenaeus vannameí). La enzima fue extraída del tejido por maceración, obteniendo un extracto crudo clarificado por centrifugación. Posteriormente se realizó un fraccionamiento con sulfato de amonio en un rango de 40-70% de saturación y se utilizaron centricones de corte de 30 KDa para realizar el desalado. Posteriormente la muestra fue sometida a cromatografía de intercambio iónico en una columna HiPrep 16/1 O FF, y finalmente se realizó una cromatografía de afinidad en 1 ml de resina N6-(6-Amino) hexyl-AMP Sepharose. Las fracciones obtenidas de las corridas cromatográficas no presentaron actividad enzimática. Posiblemente esto se debe a que la enzima BADH no se sintetiza en grandes cantidades en el camarón. Sin embargo, las fracciones obtenidas de la cromatografía de afinidad, mostraron una sola banda de proteína en el gel de electroforesis nativa (sistema Laemli). Esta banda migra al mismo peso que la BADH renal de cerdo utilizada como control en las corridas electroforéticas. Nuestros resultados sugieren que la BADH de camarón blanco puede ser aislada y purificada de tejido de L. vannameí, utilizando el esquema propuesto y la proteína tiene un peso molecular de 233-250 kDa que corresponde a otras BADH de distintos organismos.