Obtención de los extremos 5' y 3' del ADNc de Quimotripsinógeno II de Sardina Monterey (Sardinops sagax caerulea)

Abstract

Al principio de este trabajo se contó con una secuencia parcial de 540 nucleótidos correspondiente a una región central del gen que codifica para el quimotripsinógeno II de sardina Monterey, la cual fue deducida por Félix (2006). Se diseñaron iniciadores a partir de esta región para conocer las secuencias de las regiones desconocidas (inicio y fin de traducción del gen) y se utilizó la técnica rápida amplificación de extremos de ADNc (RACE) para realizar las amplificaciones. La muestra de donde se parte es una mezcla de ADN complementario (ADNc) obtenido por Anaya (2008) a partir de ARN total extraído de ciegos pilóricos de la sardina Monterey. En este trabajo se estudia la estructura primaria, es decir la secuencia deducida de aminoácidos del quimotripsinógeno II de sardina Monterey (Sardinops sagax caerulea) y se compara con quimotripsinógenos de otros peces, tales como el quimotripsinógeno adaptado al frío de bacalao del Atlántico (Gadus morhua) (UniProtKB/Swiss-Prot: P47796.1); los quimotripsinógenos de Sardinops melanostictus (GenBank: BAM62884.1), Pagrus major, Danio rerio, Thunnus orientalis, Salmo salar y Gadus morhua (GenBank: CAB43766.1); y con quimotripsinógenos de organismos mesófilos, tales como Sus scrofa, Bos taurus y Homo sapiens. En el presente trabajo se logró avanzar en la secuencia del quimotripsinógeno II de sardina Monterey hasta completar 217 aminoácidos. En base a la comparación de la composición de quimotripsinógenos de otras especies de peces con la secuencia del quimotripsinógeno de sardina Monterey obtenida en este trabajo, se estimó que el quimotripsinógeno II de sardina Monterey consta de 245 aminoácidos y su forma activa la quimotripsina consta de 230 aminoácidos, por lo que faltaron 28 aminoácidos para completar el gen que codifica para el quimotripsinógeno y 13 aminoácidos para completar la quimotripsina. Sin embargo, hasta que se logre completar el extremo 5’ se conocerá con exactitud su secuencia. Quimotripsina II de sardina Monterey presentó una composición de aminoácidos semejante a la de enzimas adaptadas al frío mostrando preferencias por los residuos típicos de estas mismas. Más específicamente presentó una composición y distribución de aminoácidos semejante a la quimotripsina A adaptada al frío de Gadus morhua. Quimotripsina adaptada al frío de Gadus morhua y quimotripsina II de sardina Monterey mostraron similitudes entre sí en regiones específicas que se encontraban conservadas en los organismos mesófilos mencionados anteriormente.